2018-10-28 18:28:33幻羽

【“新世界秩序”開始了!--上】

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                   【“新世界秩序”始了!--

揭穿疫苗的十大罪!比爾蓋Bill-Gates要大量滅絕人口?!

2016-03-05始人之一,世界上最富有的人,比茨正在使用他的的的慈善基金 ()---和梅林達蓋茨基金會來處理,解第三世界食短缺的和消除困的問題。在最近的一次美加州會議上,茨透露了一所知的“慈善-人口少”計劃外的名是“”。  

茨在加州長灘2010論壇出了番言。他的演講題目是“新到0”,他提出了一在科上看起非常荒的建,即在2050年之前人CO2排放量成零。在演到四分半候,:“首先我要面人口問題在世界上有68人口,而且90人口。如果我在新疫苗,醫療健康,生殖健康服方面做出一好成,我可以降低10%15%的(人口)。”  

這個世界上最有影力之一的人非常清晰地提出了他想用疫苗來減少世界人口的增當蓋到疫苗的候,他言就代表了一定的威。這是因為,在21011月份,在達沃斯精英論壇上,蓋茨就宣布他將在今後十年的時間捐贈100億美元,用來研發和注射新的疫苗給發展中國家的小孩子。  

這上百億美元的蓋茨捐贈主要是用於疫苗事業,特別是在非洲和別的不發達國家。比爾-美琳達基金是“GAVI聯盟”的發起人之人,Global Alliance for Vaccinations and Immunization)全稱是“全國疫苗免疫聯盟”,這個聯盟與世界銀行,世界衛生組織以及疫苗行業都是合作者。GAVI的目標是給每一位出生在發展中國家的新生嬰兒都注射疫苗。  

這個目標聽起來像高尚的慈善工作。但問題是,疫苗行業一直被報導將一些無法預測的或證明是有害的疫苗注射給第三世界的人口。這些疫苗在西方已經被禁止使用了。一些組織認為注射這些疫苗並不是讓孩子健康,是想讓這些人們更容易生病,更容易受感染,以至過早死亡。

到底疫苗的真相有多恐怖?

疫苗供應商從疫苗製造商那裡賺到極龐大的利潤,每年利潤高達數以百億美元,售賣疫苗圖利。

其中最多人接種的是子宮頸癌疫苗:引致很多副作用,包括腦硬化及發炎……

疫苗並非來自天然,疫苗是人工製品,內裡包含危險與有毒物質,有害的物質包括:

一、水銀

二、鋁

三、甲醛

四、動物物質

五、生物病毒

每次接種疫苗,正在把藥性物毒物放進體內。

查證疫苗內含材料,就可以列出疫苗有多大毒害。

一、水銀

孩子的腦部在發育時期,會快速吸收有害的物質,即使非常少劑量的水銀,都可能會導致行路緩慢,說話能力銳減;注意力不足,學習障礙;思考力遲鈍;大腦麻痺;耳聾、甚至瞎眼;成人不育、血壓不正常;記憶力減退、顫抖;視力衰退;手指及腳趾麻痺;甚至能引起心臟病。

二、鋁

「鋁」是神經毒素,包含在一系列孩子及成人經常注射的疫苗中。

鋁會影響人體的免疫力,會導致腦部發炎,神經系統疾病,對人體產生極深遠、廣泛的健康問題,其實比水銀更嚴重。

6 個月大的嬰兒體內被發現的鋁,比「美國食物及藥物控制局」規定的安全含量高出15-39 倍……

三、甲醛

致癌物,可以引致癌症、器官衰竭,甚至死亡。

有科學研究指出,「甲醛」導致超過一半以上的新增兒童癌症個案,包括血癌、腦癌、中樞神經系統破壞。

四、動物物質

某些疫苗是源自另一些動物,包括牛、猴子、豬、雞的胚胎。

把其他生物的基因注射入人血裡面。有可能導致人體基因結構改變。

專家已經指出這種疫苗,明顯地跟人類癌症有關,例如導致:快速致命的肺癌、骨髓癌、兒­童腦腫瘤、與及其他癌症,都與動物病毒及注射疫苗有關!

五、動物病毒

可以導致腦部長期的受損。

把其他動物的病毒,透過疫苗傳播到人體內,導致人感染其他動物的病毒,然後把變種的病毒由人傳播給人。

以上只是略舉疫苗中,最廣為人知的有毒物質。

事實上,有科學研究花了過百萬美元,把疫苗與自閉症的關係詳細列明……

回顧 1950 年,孩子在 6 歲前只需接種 7 支疫苗,但疫苗的數字像天文數字般激增,今天已增加至 49 支。

這是 2010 12 月公布的研究所得,一項由 vaccineinjury.info 研究,比較有接種和無接種疫苗兒童的健康狀況,結果已公諸於世,接種疫苗的兒童比沒有接種的兒童:很多嬰兒在出生後不久,於接種疫苗後不久死亡!

大多數嬰兒瘁死症狀,是由於疫苗所導致,大家瀏覽互聯網絡尋找到極大量資料……

耳朵感染的數字高出 22 倍、鼻竇炎的數字高出 32 倍、敏感症數字高出 4 倍、哮喘數字高出 2 倍、發高熱數字高出 4 倍、過度活躍症數字高出 3 倍、自閉症數字高出 19 倍……

大部分知情人士和有財有勢的人,都沒有接種疫苗,這是疫苗公司不願意公開的秘密!

就是疫苗並不安全!並不有效!但是主流媒體仍然大肆宣傳。

基本上,疫苗是包含多種有毒物質及材料,用世人的健康作賭注,為疫苗公司帶來巨額收入。當然,他們不想公開這秘密。

不過,堆積如山的證據已經顯明,疫苗可以導致腦部受損,甚至死亡,但決定是否應該接種疫苗?交由你自己決定!

最新的報告:聯合國計劃-2030年每個人植入一個生物識別ID,這是他們的一部分全球目標的議程,他們正朝著實現這一目標,特別是針對難民人口已經進行。 FindBiometrics的報告,聯合國的最終目標是有機會上每一個男人,女人和孩子在這個星球上,到2030年有生物識別  

比爾蓋茨:「世界上目前有68億人口,未來會上升至90億人口,目前我們取得了巨大的成功,利用新推出的疫苗,醫療計劃、更新醫療服務,我們可以令人口銳減,比現有人口減少10-15%

向第三世界傾倒毒素

正如羅馬的流行病專家托馬斯所說,「為什麼他們將這些疫苗,給了發展中國家?」

流行感冒的預警已經在世界大部份地方被取消了。

在窮國中最大的威脅是心臟和消化疾病,病毒性的疾病並不需要太多的關注。

甚麼才是富國捐贈 8 億支疫苗的醫學原因呢?

流行性感冒在這些充滿大量陽光中的國家中是很小的問題,而讓人談之色變的「Hxy」是歷史上最不嚴重的流感之一。

「優生學」的新形式?

不幸的是,蓋茨對於減少黑色人種和其他少數人種人口數量的想法並不新穎。

在威廉恩道爾的《毀滅的種子》書中就提到,自從 1920 年以來,洛克菲勒基金就已經資助在德國的優生學研究。

他們通過在柏林和慕尼黑的基金會,以及有名的第三帝國。

他們讚揚希特勒德國的讓人們絕育的做法以及納粹關於人種「純化」的做法。

約翰 D 洛克菲勒三世是一個終生的優生學鼓吹者,他用他那個「免稅」基金開始了他的新馬爾薩斯新人口減少運動協會。

比爾蓋茨的好朋友,大衛洛克菲勒和他的洛克菲勒基金會在 1972 年就與世衛組織及其他組織參與了一個主要的項目來達到一個「新的疫苗」。

1990 年早期,世衛組織和洛克菲勒的項目進行了大規模應用於天竺鼠—「人類」的試驗。監視破傷風疫苗的注射——在尼加拉瓜,墨西哥和菲律賓。

一個羅馬天主教贊助的機構非常懷疑世衛組織的動機並測試了幾瓶疫苗。

他們發現了絨膜促性腺激素 HCG,這是用來防止生鏽鐵釘導致的傷口的感染和別的細菌感染,是疫苗中的重要組成部份。

破傷風病是真實的,但是也是很少有的。

同時,非常奇怪的是,HCG是一個天然的荷爾蒙激素用於「妊娠」保護,但是,一旦HCG與破傷風疫苗有毒載體混合,將刺激一種反HCG的抗體,使婦女不能保持妊娠。這就成為了一種隱秘的流產。

已經有數起來自菲律賓和尼加拉瓜關於HCG荷爾蒙激素的報導。

比爾美琳達基金會與作為轉基因生物技術的創造者洛克菲勒基金會,他們贊助「非洲綠色革命聯盟」AGRA的項目。

孟山都,杜邦,道氏以及其他的主要轉基因農業巨頭都進入「非洲綠色革命聯盟」AGRA的深處。

他們將AGRA作為一個向非洲撒播轉基因種子的門戶,他們通過貼有「生物技術」的標籤銷售轉基因種子。

蓋茨基金在AGRA的代表人是羅伯特赫茨博士,25 歲,在孟山都中負責「農達 Roundup」農藥和轉基因技術的推廣。他的工作就是用蓋茨的錢來推廣轉基因農產品在非洲的種植。

因歐巴馬的干預,到目前為止,南非是非洲唯一一個允許種植轉基因農作物的國家。

2003 年「BURKINA FASO」授權轉基因試驗。

2005 年安南的生物安全立法和數名高官都表達了對轉基因農作物的興趣。

AGRA在非洲已經被當成「農業仲介者」用於建立各種關係,剛開始他們並沒有提及轉基因種子或是轉基因除草劑,一旦時間成熟,他們就會大規模地推銷轉基因。

轉基因,甘草膦和人口減少

轉基因產品從來沒有被人類或是動物食用證明過是安全的。

更加嚴重的是,它們具有天然的基因上的「不穩定性」,因為它們是非自然的產品,它們是通過引進一種外來的細菌,比如芽孢桿菌或者其它的物質在它們的DNA上,來改變它們的特性。

同樣危險的是在轉基因銷售合同中捆綁「農達(年年春 Roundup)」除草劑,這種除草劑在全世界被廣泛使用。

「農達」中的甘草膦成份已經被測試和證明是一種高毒性的物質,在轉基因農作物中,它的含量已經遠遠高於對於人與動物安全的規定含量。

試驗顯示極小數量的甘草膦類物質對於人體的胚胎細胞有極大的破壞作用。

特別是對轉基因作物農場的懷孕婦女的傷害會更加嚴重。

美國政府改變各種各樣的玉米,已經通過現場實驗,美國農業部提供實驗的資金,資助一個名叫「EPICYTE」的加州小型生物技術公司。

這個公司在 2001 年的新聞發布會上宣稱:

「我們有一個溫室種滿玉米,這種玉米可以產生人類的精子抗體。」獲得婦女的「不孕」,一斷單獨的基因可以控制「不孕抗體」的生產。

通過基因工程技術,已經將基因插入玉米的種子來生產出秘密植入式的避孕玉米。

本質上,這種抗體被吸引到精子的神經末梢的表層,並粘在表層使和精子負重不能前行。精子將會抖動得像跳巴西的貼身舞一樣,可以解決世界上人口過剩的問題,他們沒有透露這些需要解決人口過剩國家的名單。

通過蓋茨和洛克菲勒大方的基金會將含有殺精劑的轉基因玉米,提供給飢餓的第三世界國家的人們,使用疫苗與轉基因種子來「減少人口」。

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全球「優生」日程表

蓋茨和巴菲特都是「全球人口減少計劃」的主要贊助人。

像美國CNN的特納,的基金會參與了多個發展中國家的人口減少計劃,這些基金都是來自時代華納公司的十億美元的免稅股票期權。

這些項目都披著慈善的外衣提供健康服務給貧窮的非洲國家。

事實上,他們通過疫苗和別的醫療技術,實施的是非自願性的人口絕育計劃,這使得育齡婦女失去生育能力。

擁有巴菲特大量捐贈的蓋茨基金,同樣支持非洲引進轉基因種子,安南也大力宣揚非洲「二次綠色革命」。

在非洲,有專利權的轉基因種子目前遇到了巨大的國內抵制。

健康專家們指出以上是蓋茨真正的目的。

數以億計的錢已經用於投資危險的疫苗,這些錢本來可以提供最低標準的生活用水和處置污水的系統。只給孩子們打疫苗並不能避免孩子們會喝上不幹凈的水。

蓋茨的「TED2010」關於新疫苗減少全球人口的言論是非常明顯的,並非口誤。

懷疑的人們可以看他在「TED2009」的年度聚會,他也同樣提到了通過減少人口來改變全球氣溫上升。

對於「好人俱樂部」的權貴們來說,普通的人們就如同二氧化碳一樣的污染物。

1991 年巴西政府公佈一項數據:「巴西 44% 14-55 歲的女子已經永久絕育。」

美國「控制人口陰謀計畫」選定的 13 個國家中,全部都大量墮胎、死亡、戰亂、飢荒、販毒,以及淪為器官買賣及犯罪國家,而暗中主導者就是美國中央情報局。

該秘密檔認為:要把死亡率增加一倍,至少達到每年滅絕 2000 萬人口。

依照 1948 年聯合國憲章的定義,美國這項政策是種族滅絕政策。

但是美國不予理會,因為所有相關計畫都是機密檔,至於 30 年後滅絕了 10 億人,天曉得誰要被定罪?

當年的活體實驗國家是奈及利亞,之後從各地區延燒開來,實驗沒成功的國家則發動戰爭或製造動亂,經濟制裁。20 年後,12 個國家又被列表。

目前,活體實驗國家則變更成為中國,而活體實驗的第一地點則是台灣地區。

台灣已經確定淪陷在其中,因為台灣的政府完全搞不清楚情況,這是政客為了個人利益而造成的極大悲劇,已經無可哀救。

目前中國政府只能設法保住大陸地區的 13 億人。

美國的「控制人口陰謀計畫」不是如同 1974 年只滅絕 5 億人,這次的目標是要滅絕 30 億人。目前尚在開始的佈局階段。

而在台灣,知道真相與有條件的智者,在這 20 多年來幾乎全部移民到海外,或在近年移入大陸定居。

只要曾經食用過基因改造食物,改變程度嚴重的,可能足以構成三代內絕子絕孫的大悲劇。 

 

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【末日民潮】伊斯入侵美,促拆,共濟會精英霸-推新世界秩序!

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轉基因食品爭議(Genetically modified food controversies)是指關於食用轉基因作物及其副產品、在食品生產中利用基因工程技術等方面的爭議。這場爭議與消費者、生物技術公司、政府管理者、非政府組織和科學家都密切相關。關於基因改造食品的爭論核心包括:轉基因食品的上市標注、政府管理者的責任、相關科學研究的目的、轉基因作物對環境和健康的影響、對害蟲之抗藥性的影響、對農業生產者的影響和轉基因作物對滿足全球糧食需求的作用。

科學界的共識是此類轉基因作物及其副產品的健康安全風險並不高於傳統食品,也就是說轉基因作物的安全性是可以保證的。對轉基因食品的安全評估始於鑒定該食品是否與同類非轉基因食品“實質等同”,後者是那些已經被確認無害的傳統食品,而且目前還沒有報告宣稱轉基因食品在人身上造成疾病,但公眾還是擔心轉基因食品有害健康。雖然針對轉基因生物產品的標注在許多國家是強制性的,但美國和加拿大並不執行類似政策,在市場上轉基因食品和傳統食品是沒有差別的。

 

基因工程(genetic engineering,又稱為遺傳工程、轉基因、基因修飾)是一組使用生物技術直接操縱有機體基因組、用於改變細胞的遺傳物質的技術。包括了同一物種和跨物種的基因轉移以產生改良的或新的生物體。可以通過使用分子克隆技術分離和複製需要的遺傳物質以產生DNA序列,或通過合成DNA,然後插入宿主生物體,以此將新的遺傳物質插入宿主基因組中。可以使用核酸酶除去或“敲除”基因。基因靶向是使用同源重組來改變內源基因的不同技術,並且可以用於缺失基因,去除外顯子,添加基因或引入點突變。

通過基因工程產生的生物體被認為是轉基因生物體(GMO)。第一種轉基因生物是1973年產生的細菌和1974年的轉基因小鼠。利用細菌產生胰島素在1982年商業化,轉基因食品自1994年以來一直銷售。作為寵物設計的第一種轉基因生物GloFish200312月首先在美國銷售。

遺傳工程技術已經應用於許多領域,包括研究、農業、工業生物技術和醫學。用於洗衣洗滌劑和藥物如胰島素和人生長激素的酶現在在轉基因(GM)細胞中製造,實驗性轉基因細胞系和轉基因動物例如小鼠或斑馬魚正用於研究目的,並且轉基因作物已經商業化。

遺傳工程是改變生物的遺傳組成使用的技術,包括了刪除可遺傳材料,和將生物體外直接製備的DNA導入宿主或細胞,然後與宿主融合或雜交。這涉及使用重組核酸(DNARNA)技術來形成可遺傳遺傳材料的新組合,然後通過載體系統間接地或通過顯微注射,大量注射和微囊化技術直接摻入該材料。

遺傳工程通常不包括傳統的動物和植物育種、體外受精、多倍體育種、人工誘變和細胞融合技術,因為在該過程中不使用經過重組核酸或遺傳修飾的生物體。然而,歐盟也將遺傳工程廣泛定義為包括選擇育種和其他人工選擇手段。克隆和幹細胞技術,雖然不被認為是遺傳工程,但也是與基因工程密切相關的,可以在其中使用基因工程。合成生物學是一個新興的學科,它使遺傳工程進一步將人工合成的材料從原材料引入生物體。

如果將來自另一物種的遺傳物質添加到某生物體中,則所得生物稱為轉基因生物。如果使用來自相同物種的遺傳物質或可以與宿主自然繁殖的物種,則稱為同源基因改造遺傳工程也可以用於從目標生物體去除遺傳物質,創建一個基因敲除生物體在歐洲,遺傳修飾是遺傳工程的同義詞,而在美國,“基因修飾”一詞也可以指常規的育種方法。加拿大的監管制度是基於產品是否具有新穎的特徵,而不管來源的方法。換句話說,如果產品攜帶一些先前在物種中未發現的性狀,則其被調節為遺傳修飾,無論其是使用傳統育種方法(例如選擇育種,細胞融合,突變育種)還是遺傳工程產生的。在科學界,“基因工程”這個術語並不常用。取而代之的是更為具體的術語,例如“轉基因”。

數千年來,人類通過選擇性育種或人工選擇。近年來,逐漸通過誘變改變了物種的基因組。而遺傳工程作為直接操縱DNA、由人外部育種和突變是自20世紀70年代產生的。

“遺傳工程”這個術語最早由傑克·威廉姆森在1951年——也就是DNA在在遺傳中的作用得到了阿弗雷德·赫希和瑪莎·蔡斯的證實的前一年——出版的科幻小說“龍之島中創作。1953年,詹姆斯·沃森和法蘭西斯·克裏克發現DNA分子具有雙螺旋結構。斯丹利·溫鮑姆的1936年的科幻故事普羅透斯島(Proteus Island)中探索了直接遺傳操作的一般概念。

1972年,保羅·伯格通過將來自猴病毒SV40DNA與λ病毒的DNA結合而產生了第一個重組DNA分子。在1973年,赫伯特·博耶和斯坦利·科恩通過將抗生素抗性基因插入到大腸桿菌細菌的質粒中而產生了第一個轉基因生物。一年後,魯道夫·耶尼施通過將外來DNA引入其胚胎中創建了一種轉基因小鼠,使其成為世界上第一個轉基因動物這些成就導致了科學界對基因工程的潛在風險的關注,這些問題首先在1975年的阿西洛馬會議上進行了深入討論。這次會議的主要建議之一是,在技術的安全性得到確認之前政府應加強對重組DNA研究的監督。1976年,赫伯特·博耶和羅伯特·史旺森創立了遺傳工程公司基因泰克(Genentech),該公司在大腸桿菌中生產了人類蛋白生長抑素。 基因泰克在1978年宣佈生產轉基因生產的人胰島素。1980年,美國最高法院在DiamondChakrabarty案中裁定,遺傳改變的生命可以獲得專利。此種借由細菌生產的胰島素以“優泌林”作為品牌名稱,在1982年經美國食品藥物監督管理局批准銷售。

20世紀70年代,威斯康辛大學麥迪森分校的研究生史蒂文·林多(Steven Lindow)與D.C.阿爾尼(D.C.Arny)和C.韋瑟(C.Weather)發現了一種細菌,它被認為是在冰成核過程中發揮作用的丁香假單胞菌,並在1977年發現了一種突變的減冰細菌。 林多博士(現在是加州大學伯克利分校的植物病理學家)後來成功創建了一個重組減冰細菌。1983年,一家生物技術公司先進遺傳科學公司(Advanced Genetic SciencesAGS)申請美國政府授權,使用丁香假單胞菌的減冰菌菌株進行田間試驗,以保護作物免受霜凍,但環境組織和抗議者通過法律挑戰推遲了此項田間試驗四年。1987年,隨著加利福尼亞的草莓田和馬鈴薯田的噴霧,丁香假單胞菌的減冰菌菌株成為第一個被釋放到環境中的轉基因生物這兩塊測試田在測試開始前一天晚上都遭到活動家團體攻擊:“世界上第一的試驗田吸引了世界第一的搗蛋鬼”。

1986年在法國和美國進行了轉基因植物的第一次田間試驗,實驗植物為一種抗除草劑的轉基因煙草。中華人民共和國是第一個將轉基因植物商業化的國家,1992年引入了抗病毒的煙草。在1994年,佳基因公司(Calgene)獲批將Flavr Savr番茄(一種具有較長的保質期的轉基因番茄)投入市場,同年歐盟批准轉基因抗除草劑溴苯腈煙草,使其成為在歐洲商業化的第一個轉基因作物。1995年,馬鈴薯作物Bt Potato在經美國食品藥品監督管理局和美國環境保護局批准安全使用,成為美國第一個批准的抗蟲轉基因作物。

2009年,11個轉基因作物在25個國家商業化生產,主要為美國、巴西、阿根廷、印度、加拿大、中國、巴拉圭南非。

2010年,克萊格·凡特研究所的科學家創建了第一個合成基因組並將其插入空的細菌細胞。得到的細菌,名為“辛西婭”(Synthia),可以複製和產生蛋白質。在2014年,開發了一種細菌,其複製含有獨特堿基對(非腺嘌呤、胞嘧啶、胸腺嘧啶、鳥嘌呤)的質粒,是首個使用擴展遺傳字母表的生物體。

操作與步驟

如果將一種生物的DNA中的某個遺傳密碼片段連接到另外一種生物的DNA鏈上去,將DNA重新組織一下,就可以按照人類的願望,設計出新的遺傳物質並創造出新的生物類型,這基因工程一般包括以下四個步驟:

獲取匹配要求的DNA片段;

構建基因的表達載體;

將目的基因導入受體細胞;

目的基因的檢測與鑒定。

獲取匹配要求的DNA片段

第一步是選擇並分離將被插入到遺傳修飾的生物體中的基因。要把目的基因從供體DNA長鏈準確地剪切下來,可不是一件容易的事。1968年,沃納·阿爾伯、丹尼爾·南森斯和漢密爾頓·史密斯第一次從大腸桿菌中提取出了限制性核酸內切酶,它能夠在DNA上尋找特定的“切點”,認准後將DNA分子的雙鏈交錯地切斷。人們把這種限制性內切酶稱為“分子剪刀”。這種“分子剪刀”可以完整地切下個別基因。自1970年代以來,人們已經分離提取了400多種“分子剪刀”。有了形形色色的“分子剪刀”,人們就可以隨心所欲地進行DNA分子長鏈的切割了。可以使用限制酶分離基因以將DNA切割成片段並進行凝膠電泳,以根據長度將它們分離出來。聚合酶鏈反應(PCR)也可以用於擴增基因區塊,然後可以通過凝膠電泳分離。如果所選擇的基因或供體生物體的基因組已經被充分研究,它可以存在于基因庫中。如果DNA序列已知,但沒有該基因的拷貝可用,則可以人工合成。

要插入遺傳修飾的生物體中的基因必須與其他遺傳元件組合以使其正常工作。還可以在該階段修飾基因以更好地表達或有效性。除了要插入的基因之外,大多數構建體含有啟動子和終止子區以及選擇標記基因。啟動子區啟動基因的轉錄,並且可以用於控制基因表達的位置和水準,而終止子區終止轉錄。 在大多數情況下賦予其在其中表達的生物體抗生素抗性的選擇性標記,需要確定哪些細胞用新基因轉化。

構建基因表達載體

DNA的分子鏈被切開後,還得縫接起來以完成基因的拼接。1967年,科學家們在5個實驗室裏幾乎同時發現並提取出一種酶,這種酶可以將兩個DNA片段連接起來,修復好DNA鏈的斷裂口。1974年以後科學界正式肯定了這一發現,並把這種酶叫作DNA連接酶。從此,DNA連接酶就成了名符其實的“縫合”基因的“分子針線”。只要在用同一種“分子剪刀”剪切的兩種DNA碎片中加上“分子針線”,就會把兩種DNA片段重新連接起來。

質粒載體

DNA的操作通常發生在質粒內。使用重組DNA技術,例如限制性消化,連接和分子克隆製備構建體。其中一種常見的技術是將新的遺傳物質插入宿主基因組中的特定位置,或在所需的能夠敲除的基因組位點產生突變內源基因。基因靶向技術使用同源重組來靶向特定內源基因的期望變化。這在植物和動物中發生的頻率相對較低,並且通常需要使用選擇標記基因。使用工程化核酸酶如鋅指核酸酶,工程改造的歸巢核酸內切酶(或“兆堿基”)或由TAL效應物產生的核酸酶,可以大大增強基因靶向的頻率。 除了增強基因靶向,工程化核酸酶也可以用於在產生基因敲除的內源基因中引入突變。

病毒載體

病毒載體是一種常用的工具,可將遺傳物質帶入細胞。可發生於完整活體或是細胞培養中。原理是利用病毒具有傳送其基因組進入其他細胞,進行感染的分子機制。

慢病毒載體是病毒載體中的一種在慢病毒基礎上發展起來的基因工程載體。慢病毒基因組不需要靶細胞分裂即可集成到細胞核中。來源於慢病毒的載體也體現了能夠穩定地轉導分裂和非分裂細胞(包括幹細胞)這一優勢。慢病毒載體目前已發展成為一個強大的基因轉移工具,廣泛應用於生物學研究和基因治療。慢病毒載體構建時,病毒的順式作用元件(非編碼所需的轉錄、反轉錄和包裝元素)必須與反式作用元件(酶、結構和輔助蛋白編碼)序列分離,以防止形成具有複製能力的慢病毒顆粒(RCL)。

將目的基因導入受體細胞

只有約1%的細菌天然能夠攝取外源DNA。然而,這種能力可以通過外部刺激(例如熱或電擊)誘導其他細菌產生,增加其細胞膜對DNA的通透性;已吸收的DNA可以與基因組集成或作為染色體外DNA(如質粒)存在。 DNA通常使用顯微注射插入動物細胞,其中它可以通過細胞的核膜直接注射到細胞核中或通過使用病毒載體。在植物中,通常使用農桿菌介導的重組或基因槍技術(biolistics)插入DNA

在農桿菌介導的重組中,質粒構建體含有T-DNA,其負責將DNA插入宿主植物基因組中。在感染植物細胞之前,將該質粒轉化到不含質粒的農桿菌中。然後農桿菌將天然地將遺傳物質插入植物細胞中。在生物動力學中,金或鎢的顆粒用DNA包被,然後注射到愈傷組織細胞或植物胚胎中。一些遺傳物質將進入細胞並轉化它們。該方法可以用於不易受農桿菌感染的植物上,並且還允許植物質體的轉化。用於植物和動物細胞的另一種轉化方法是電穿孔。電穿孔包括使植物或動物細胞遭受電擊,其可使細胞膜對質粒DNA可透過,在一些情況下,電穿孔細胞可將DNA摻入其基因組中。由於其對細胞和DNA的損害,基因槍和電穿孔的轉化效率低於農桿菌介導的轉化和顯微注射。

由於用於轉化的細胞通常只有一個,因此必須將該單個細胞培育成生物體。細菌由單個細胞組成並且不需要克隆再生。在植物中,這通過使用組織培養來實現。每種植物對通過組織培養成功再生具有不同的要求。如果成功,則產生在每個細胞中含有轉基因的成年植物。在動物中,有必要確保插入的DNA存在於胚胎幹細胞中。

目的基因的檢測與鑒定

選擇標記用於區分轉化的和未轉化的細胞。這些標記通常存在于轉基因生物體中,儘管已經開發了可以從成熟轉基因植物中除去選擇性標記的多種策略。當產生後代時,可以篩選基因的存在。來自第一代的所有後代對於插入的基因將是雜合的,並且必須交配在一起以產生純合動物。

進一步的測試使用PCR,南方墨點法(Southern印跡),並且進行DNA測序以確認生物體含有新基因。即將轉基因生物的基因組DNA提取出來,在含有目的基因的DNA片段上用放射性同位素等做標記,以此作為探針,使探針與基因組DNA雜交,如果顯示出雜交帶,就表明目的基因已插入染色體DNA中。該方法因發現者而命名為南方墨點法。這些測試還可以確認插入基因的染色體位置和拷貝數。基因的存在並不保證其在靶組織中以適當的水準表達,因此也使用尋找和測量基因產物(RNA和蛋白質)的方法。這些包括北方墨點法(Northern印跡),定量即時聚合酶鏈鎖反應(RT-PCR),西方墨點法,免疫螢光,酵素免疫分析法(ELISA)和表型分析。為了穩定轉化,該基因應以孟德爾遺傳模式傳遞給後代,因此也應研究該生物的子代。

應用及成果

基因工程在醫學、研究、工業和農業中的都有所應用,並且可以廣泛應用於植物、動物和微生物。

醫學

在醫學中,基因工程已經用於製造藥物,創建模型動物,進行實驗室研究和基因治療。

生產

遺傳工程用於大規模生產胰島素、生長激素、follistim(用於治療不育)、人白蛋白、單克隆抗體、凝血因數、疫苗和許多其他藥物。小鼠雜交瘤,融合在一起以產生單克隆抗體的細胞已經通過基因工程人源化以產生人單克隆抗體。正在開發遺傳工程改造的病毒,其仍然可以賦予免疫性,但缺乏感染序列。

研究

基因工程用於創建人類疾病的動物模型。轉基因小鼠是最常見的基因工程動物模型。它們已用於癌症、肥胖、心臟病、糖尿病、關節炎、藥物成癮、焦慮、衰老、帕金森病的研究和模擬。可以針對這些小鼠模型測試潛在的療法。在增加器官移植成功率方面,培育了轉基因豬。

基因治療

基因治療是人類的遺傳工程,通常通過用有效基因替代有缺陷的基因。這可以發生在體細胞組織或種系組織中。

體細胞基因治療

體細胞基因治療已針對多種疾病進行了臨床研究,包括X連鎖嚴重複合型免疫缺乏症,慢性淋巴細胞性白血病(CLL),和帕金森病2012年,Glybera成為第一個得到歐洲或美國批准,可在歐洲委員會批准後獲准用於臨床使用的基因治療藥物。

種系基因治療

關於種系基因治療,科學界一直反對使用生物技術以可遺傳的方式改變人類基因的嘗試,因為該技術才剛剛起步。隨著技術的發展、CRISPR等新技術的出現,20153月,科學家們敦促世界範圍內禁止臨床使用基因編輯技術以可遺傳的方式編輯人類基因組。20154月,中國研究人員報告了基礎研究實驗的結果引發了爭議,在這些實驗中,他們使用CRISPR編輯了不可發育的人類胚胎的DNA 201512月,世界主要科學院的科學家們呼籲暫停進行可遺傳的人類基因組編輯,包括與CRISPR-Cas9技術相關的那些。

如果技術不僅用於治療,而且用於增強、修改或改變人的外表、適應性、智力、性格或行為,也存在倫理問題。固化和強化之間的區別也很難界定。超人主義者認為人類的增強是可取的。

科研

遺傳工程是科學家的重要工具。來自各種生物的基因和其他遺傳信息轉化為細菌,以供儲存和修飾,遺傳修飾的[[細菌在該過程中產生。使用細菌的原因是其廉價易得,生長、克隆繁殖迅速,相對容易轉化,而且可以長期保存,在-80℃幾乎可以無限期儲存。分離後的基因可以儲存在細菌中,可無限增殖供給研究。

可以將生物體遺傳工程化以發現某些基因的功能。這可能是對生物表型的影響,其中表達基因或與其相互作用的其他基因。這些實驗通常涉及功能喪失,功能獲得,跟蹤和表達。

功能缺失實驗

例如在基因敲除實驗中,轉基因生物會缺少一個或多個基因的活性。敲除實驗涉及體外構建和操作DNA構建體,其在簡單敲除中由所需基因的拷貝組成,或將其改變為無功能的。胚胎幹細胞摻入改變的基因、替換已經存在的功能性拷貝。將這些幹細胞注射到胚泡中,植入以替代親代遺傳物質。實驗者借此分析由該突變引起的缺陷,從而確定特定基因的作用。這項操作在發育生物學中使用頻繁。在黑腹果蠅等生物體中另一種可行的方法是在大群體中誘導突變,然後篩選後代以獲得所需的突變。類似的方法可以用於植物和原核生物中。功能喪失可說明某種蛋白質是否是某項功能所必需的,而非說明某種蛋白質具有某項功能。特別是如果功能需要多個蛋白質,那麼只要缺少其中一個就會喪失這項功能。()

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