因為現代醫學發展迅速，平均壽命延長造成以老年性為主的疾病不斷增加，其中又以血液循環疾病最為重要，甚至世界各國常見的十大死因之一就是血管血栓症及其相關疾病，例如：缺血性腦循環障礙、突發性心絞痛、急性心肌梗塞、動脈硬化、慢性靜脈炎等等，因此，從事改善血液循環的研究成為重要的醫療方向。以止血生理而言，血小板參與了一連串的止血反應，而產生一強固的血栓，使血液無法外流而達到止血的效果。此外，血小板尚扮演著其他非止血性的生理功能，包括對細菌及寄生蟲之清除、具有吞噬外來物質的作用、有殺菌作用等，在許多病理病變上，血小板也扮演了不同程度的重要性，如血栓症的產生，腫瘤細胞的轉移，過敏反應和氣喘以及動脈硬化都有血小板的參與，所以不論在止血生理或血栓病理上，血小板皆扮演相當重要的角色。利用抗血小板凝集的活性測定，可以篩選天然物中改善血液循環的藥物，再經由結構與活性關係的研究，以利新藥的發展。因此，有效的抗血栓或是抗血小板藥物是迫切需要的，也是目前天然藥物研究的重點之一。

抗血小板凝集活性之測定：

(A) 富含血小板血漿 (Platelet-rich plasma, PRP) 之製備：

以 3.8 % 的 sodium citrate 為抗凝血劑，與全血以 1:14 (v/v) 之比例混和，在室溫下立即以 90 X g 離心十分鐘，所得上層液即為富含血小板血漿。

(B) 血小板懸浮液 (Platelet suspension, PS) 之製備：

根據 Teng 等人的方法，用 100 mM EDTA 與兔子 (New Zealend White) 耳靜脈抽出血以 1：14 的比例混合，在室溫下立即以 90 X g 離心十分鐘，取出上層富含血小板血漿後，再以 500 X g 離心十分鐘。除去血漿後，將下層血小板以含有 EDTA (2 mM) 及 bovine serum albumin (BSA, 3.5 mg/ml) 的 Tyrode 溶液懸浮之，並於相同轉速下離心十分鐘，所得血小板以不含 EDTA 的Tyrode 溶液懸浮並離心後，再以 Tyrode 溶液使其懸浮，並以 Coulter Counter (Model ZM) 計算血小板數目，調整其計數為 4.5 X 10⁸ platelets/ml，最後加入 1 mM Ca⁺²，靜置三十分鐘後，進行實驗。Tyrode 溶液除了含有 BSA 外，其他組成如下，(mM)：NaCl (136.9)、KCl (2.7)、MgCl₂ (2.1)、NaH₂PO₄ (0.4)、NaHCO₃ (11.9) 和 glucose (11.1)。

(C) 血小板凝集之測定：

血小板凝集反應乃根據 O'Brien 之混濁度測定法，以 Lumi-aggregometer (Chrono-Log Co., U.S.A.) 測之。將製好的血小板加入經 Silicon 包衣的小玻璃管中，並以小磁棒作每分鐘 1200 轉的攪拌。在加入凝集引發劑前三分鐘添加抑制劑，全部過程皆在 37℃ 下進行。凝集程度的計算，係以 PRP 或 PS 的吸光度作為 0 ﹪的血小板凝集，以不含血小板的血漿 (platelet poor plasma, PPP) 或 Tyrode 溶液吸光度作為 100 % 的血小板凝集。使用下列公式計算：

                     加凝集引發劑前的吸光度－加凝集引發劑後的吸光度

凝集(%)＝ _____________________________________×100 ﹪

                  加凝集引發劑前的吸光度－Tyrode溶液或(PPP)的吸光度

(D) 實驗材料：

1. Adenosine-5’-diphosphate (ADP, sodium salt)

2. Arachidonic acid (AA)

3. Thrombin (Thr)

4. Collagen (Type 1, bovine achilles tendon)

5. Ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA)

6. Platelet-activating factor (PAF)

7. KCl, NaHCO₃, NaCl, MgCl₂, NaH₂PO₄, glucose

(E) 測試的化合物：

由毛瓜馥木[Fissistigma oldhamii (Hemsl) Merr.]與多脈瓜馥木 [Fissistigma balansae (A. DC.) Merr.]所分離到之化合物，包含 2個dioxoaporphine型生物鹼化合物；noraristolodione及norcepharadione B，11個aristolactam型生物鹼化合物；piperolactam A、piperolactam C、aristolactam AII、aristolactam AIIIa、aristolactam BII、aristolactam BIII、aristolactam FII、goniothalactam、velutinam、stigmalactam I及stigmalactam II，與17個aporphine型生物鹼或其鹽類衍生物；L-(+)-hernovine HCl、(+)-N-methylhernovine picrate、(+)-N-methyllaurotetanine MeI、(+)-laurolitsine picrolonate、(+)-N-methyl-10-O-methylhernovine、(+)-nornuciferine、L-(+)-nandigerine HBr、(+)-N-methylovigerine picrate、(-)-roemerine HCl、(+)-O,O,N-trimethylhernovine MeI、(+)-N-methylhernovine MeI、(+)-magnoflorine picrate、(+)-O,N-dimethylnandigerine MeI、(+)-O,N-dimethylactinodaphnine、7-hydroxydehydrothalicsimidine、7-hydroxydehydroglaucine及7-dehydrolirinidine。

(F) 結果與討論:

本實驗以aspirin當作對照組，它可以完全抑制由AA所引起的血小板凝集，但對於由其他誘導劑所引起的血小板凝集則完全無抑制作用，因此，以上測試的生物鹼之抗血小板凝集活性是與aspirin不同，aspirin是一種cyclooxygenase inhibitor。上述之結果可以得到以下的結論：

1.在dioxoaporphine及aristolactam類化合物結構與活性的相關性：

第一、兩類化合物主要對於AA及collagen所誘發血小板的凝集作用有較佳的抑制效果。

第二、aristolactam類化合物結構，於C-2、C-3及C-4接有含氧取代基，具有最強的抑制PAF誘導血小板凝集活性，如果D環接上一個OH基則其活性下降。

第三、兩類化合物的結構，於A環上有二個甲氧基取代，D環無取代，反而會促進血小板凝集。

2.在aporphine類化合物結構與活性的相關性：

第一、dehydroaporphine類化合物對於AA及collagen所誘發血小板的凝集作用有較佳的抑制效果，如果C-7接上OH基，會增強抑制PAF誘導血小板凝集活性。

第二、aporphine類化合物經製備形成鹽類，會改變抗血小板凝集活性，其影響並無規律。