1.將tissue從-80度C取出 泡入1*PBS 室溫10分鐘
2.放入4度C的paraformaldehyde 4度C30分鐘
(記得補玻片 要先用一次水潤洗 目的:增加體積 減少solution消耗量)
3.1*PBS清洗3次
(要shaking 45rpm)
4.先用0.1%Triton*100的PBS泡2分鐘 (目的:軟化membrane)
然後放入1%BSA和0.1%Tween20的1*PBS 4度C 16小時(目的:除去nonspecific的物質)
5.將一級抗體放入N52 mouse →隔天(11/6)
取出→放入含1%BSA.0.1%Tween20的1*PBS中清洗3次 每次5min.
將二級抗體放入TRITC mouse →隔天(11/7)
取出→重複上一步驟 (註:進入此步驟後皆要避光!!)
將一級抗體放入peri. rabbit →隔天(11/8)
取出→重複上一步驟
將二級抗體放入FITC rabbit →隔天(11/9)
(TRITC染紅.FITC染綠. 2級抗只要能辨認1級抗就行 目的在放大訊號.螢光)


未完待續