2004-09-09 16:56:16lad
乳牛黴漿菌性乳房炎之發生與監測方法之應用
乳牛黴漿菌性乳房炎之發生與監測方法之應用
乳房炎在我國為乳牛重要疾病,與繁殖障礙及蹄病並列為三大主要乳牛疾病之一。在集約式飼養之環境與型態,常使得乳房炎之比率居高不下,且為淘汰牛比率上佔重要主因之一。常隨著季節變化而頻率顯著增高,以夏季尤為明顯,不僅乳牛本身健康受損,酪農收益明顯受損,且影響生乳品質,此亦與乳製品之品質提高息息相關。由於我國氣候型態屬高溫多濕,乳房炎發生比率已較他國偏高,加上飼養型態中對於乳房炎預防措施常不完備,且時常發生濫用藥品進行治療,造成非病原性細菌轉弱為強,進而形成頑固性的感染,黴菌性及黴漿菌性病原趁機而起(1,3,6),形成無藥可醫的現象,此為目前國內因乳房炎淘汰牛隻的主因。在以前國內之乳牛乳房炎之研究中,趙等（7）調查中部地區潛在性乳房炎發現有0.2%為黴菌性,在當時之調查認為在本省以Staphylococcus spp. 及 Streptococcus spp.為主。且認為在CMT陽性而無法分離到細菌,屬於培養陰性之潛在性乳房炎（Aseptic subclinical mastitis）,其造成之原因可能為Mycoplasma spp. 徐（2）自740個乳分房樣品中進行黴漿菌的分離,分離率僅4.05%。民國90-91年筆者(4)就乳房炎之調查發現,在有菌分離或檢測陽性結果中,細菌類之感染,具傳染性之病原僅Staph. auerus佔6.4%(9/141)最高,而其他傳染性病原僅佔少數,但環境性感染菌則佔多數,其中以E. coli最高(24.8%, 35/141),此結果顯示在台灣之細菌性乳房炎以環境性為主(3,4)。針對乳房炎分離之細菌進行藥物敏感性試驗發現,在台灣長期的藥物濫用,大多數之細菌的抗藥性皆有增強趨勢(4)。在黴漿菌引起之乳房炎方面,國外早已相當重視,且有報告指出黴漿菌會引起乳牛場隻乳房炎爆發,導致乳品質下降,生乳體細胞升高而導致生乳廢棄增多等現象,且亦造成場內乳房炎持續不段的增加現象(9,11,14,16)。因此對於培養不易之黴漿菌的檢測方法的改進不於餘力(8,10,11,12)。但在國內因檢測方式仍僅局限於培養方式,因其分離時間冗長,且不易分離形成乳房炎病原監測上的死角。筆者參照劉等(15 ) Nested PCR方法於90-91年採自中南部計18個乳牛場之乳房炎病例進行黴漿菌之監測發現,在有菌樣本中有40-50%陽性率(3,4)。在研究中亦發現黴漿菌與細菌混合感染比率相當高, 此可能為乳房炎一直無法根治原因之一(3,4,5),也造成乳房炎之治療上,日增困難。因此在目前對於乳牛乳房炎的降低,有必要針對個別發生嚴重之乳牛場進行監測並探討其原因,以提供不同的防治方法,期能減少乳牛場乳房炎發生率。
引起乳房炎之黴漿菌甚多,但其中Mycoplasma bovis 被歸類為具高傳染性之乳房炎病原。Ghadersohi等人(11,12)利用對Mcoplasma bovis 極為敏感之PCR進行針測澳洲牛乳房炎發現,在Mcoplasma bovis感染牛若與主要乳房炎之細菌病原合併感染會有有持續高之體細胞數。且在測定M. bovis之77%陽性牛中,19%為單獨感染,17%則與主要乳房炎之細菌病原合併感染,40%與非主要乳房炎之細菌病原合併感染。筆者於91年採用Baird 等人(8 )方法進行具傳染性Mycoplasma bovis 之nested PCR測定,比率並不高, 但仍需注意其根除以免造成傳染 (6)。由以上顯示目前國內黴漿菌之感染,仍以非傳染性黴漿菌為主,且會與細菌或黴菌共同感染,而具傳染性Mycoplasma bovis仍佔少數。故我國乳牛乳房炎之感染已由傳統之傳染性細菌感染為主軸,逐漸轉變為環境性細菌與黴漿菌共通感染之模式出現,而在現場常見乳房炎持續不斷發生,且有部份牛隻之乳房炎臨床發現治療好了又發生,其原因在此。進一步探究其原因,亦與目前乳房炎製劑中,多為治療細菌類或黴菌類之藥物,而無殺滅黴漿菌之乳房炎製劑,造成檢驗上僅檢測細菌和黴菌,忽略黴漿菌,形成用藥上僅將細菌或黴菌壓制或殺滅,但黴漿菌仍存在而不受影響,形成致病原,使得酪農乳房炎用藥比率逐漸攀升又不見效果,此可能是我國目前許多牧場乳房炎之問題核心之一。由於目前鮮乳政策朝向低生乳體細胞數,而黴漿菌性或混合菌性之乳房炎對此影響層面甚大,因此,如何降低其發生率為重要課題之一。在目前診斷上,細菌及黴菌已有良好之診斷方法及藥物敏感性試驗,但黴漿菌篩檢上,利用PCR方法雖能達到偵測之目地,如果在大量樣品時則無法及時獲得結果,因此除在診斷上必須再進一步發展有效、快速且能大量篩檢黴漿菌的方法,例如酵素免疫分析法(ELISA)或免疫墨點法(Immunodot)等來進行篩檢。另外,發展抗細菌與黴漿菌之併用之乳房炎治療藥劑為目前急需,才能使酪農及時投與正確藥物,對此類之乳房炎才有真正的療效。此需產、官、學界三者互相配合建立乳房炎檢測系統與治療藥劑開發,纔能真正有利於酪農對於頭痛之乳房炎問題的改善及正確的用藥。
參 考 文 獻
1. 郭志祺。1990。乳牛黴漿菌性乳房炎及子宮內膜炎和治療方法之研究。台灣大學碩士論文。
2. 徐慶霖。1988。臺灣中部地區乳牛Mycoplasma 之分離與發生牛乳房炎關係探討。中興大學碩士論文。
3. 劉世賢、 吳虹慧、呂車鳳 、劉炳燦、施閔郡、林修文。2002。牛乳房炎黴菌分離及藥物敏感性試驗 台灣省畜牧獸醫學會91年度春季學術研討會 p.79
4. 劉世賢、施閔郡、劉炳燦、黃森源、吳虹惠、余明德、廖明輝。2002。乳牛乳房炎細菌分離鑑定及藥物敏感性試驗。中華民國獸醫學會暨臺灣省畜牧學會91年度聯合學術發表會。P135。
5. 劉世賢、陳致吟、廖明輝、劉宏仁、吳虹慧、劉炳燦、馮翰鵬。 2001。應用聚合酵素連鎖反應偵測乳牛乳房炎之黴漿菌感染。台灣省畜牧獸醫學會九十年度春季研討會。p.58。
6. 劉世賢、蔡惠萍、廖明輝、陳致吟、羅振宏、劉炳燦、黃森源。2002。應用巢式PCR檢測乳房炎乳汁中之Mycoplasma bovis。中華民國獸醫學會暨臺灣省畜牧學會91年度聯合學術發表會。p133。
7. 趙瑞龍、楊忠亮、董好德、張登欽。1997。臺灣中部地區乳牛潛在性乳房炎調查。中華獸醫誌。 23:61-65。
8. Baird, S.C., J. Carman, R.P. Dinsmore, R.L. Walker and J.K.Collins. 1999. Detection and identification of Mycoplasma from bovine mastitis infections using a nested polymerase chain reaction. J. Vet. Diagon. Invest. 11:432-435.
9. .Beaudeau, F., H. Seegers, C. Fourichon and P. Hortet. 1998. Association between milk somatic cell count up to 400,000 cell/ml and clinical mastitis in French olstein cows. Vet. Rec. 143:685-687.
10. .Buttler, J. , C. Pinnow, R. Rosenbusch and Leo. Timms. 2000. Development of a method PCR for detection of Mycoplasma bovis in preserved milk samples. Pacific Ccongress on Milk Quality and Mastitis Control. P. 322.
11. Ghadersohi, A., R.G. Hirst, J. Forbes-Faulkener and R.J. Coelen. 1999. Preliminary studies on the prevalence of Mycoplasma bovis mastitis in dairy cattle in Australia. Vet. Microbiol. 65:185-94.
12. Ghadersohi, A., R.J. Coelen. and R.G. Hirst. 1997. Development of a specific DNA probe and PCR for detection of Mycoplasma bovis. 56:87-98.
13. Jasper, D.E.. 1976. Coliform mastitis in pastered herds. Theriology 6:175-178.
14. Jasper, D.E.. 1977. Mycoplasma and mycoplasma mastitis. J. Am. Vet. Assoc. 170:167-72.
15. Liu, H. J. , Y.H. Wu, M.C. Tung, C.D. Chang, M. Y. Lin and C.H. Tu. 2000. Detection of Mycoplasma using two-step polymerase chain reaction. Bulletin of National Pingtung University of Science and Technology. 9:109-112.
16. Mackie, D.P., D. Finlay, N. Brice and H.J. Ball. 2000. Mixed mycoplasma mastitis outbreak in a dairy herd. Vet. Rec. 147:335-336.
(本篇載於中國化學之中化藥訊 2004 60:22-25,內有相關圖片因無法貼上,請由中化藥訊獲得)
ps.此一結晶之產生,致吟、惠萍及大動物室同學們皆有貢獻,在此一併致謝。
乳房炎在我國為乳牛重要疾病,與繁殖障礙及蹄病並列為三大主要乳牛疾病之一。在集約式飼養之環境與型態,常使得乳房炎之比率居高不下,且為淘汰牛比率上佔重要主因之一。常隨著季節變化而頻率顯著增高,以夏季尤為明顯,不僅乳牛本身健康受損,酪農收益明顯受損,且影響生乳品質,此亦與乳製品之品質提高息息相關。由於我國氣候型態屬高溫多濕,乳房炎發生比率已較他國偏高,加上飼養型態中對於乳房炎預防措施常不完備,且時常發生濫用藥品進行治療,造成非病原性細菌轉弱為強,進而形成頑固性的感染,黴菌性及黴漿菌性病原趁機而起(1,3,6),形成無藥可醫的現象,此為目前國內因乳房炎淘汰牛隻的主因。在以前國內之乳牛乳房炎之研究中,趙等（7）調查中部地區潛在性乳房炎發現有0.2%為黴菌性,在當時之調查認為在本省以Staphylococcus spp. 及 Streptococcus spp.為主。且認為在CMT陽性而無法分離到細菌,屬於培養陰性之潛在性乳房炎（Aseptic subclinical mastitis）,其造成之原因可能為Mycoplasma spp. 徐（2）自740個乳分房樣品中進行黴漿菌的分離,分離率僅4.05%。民國90-91年筆者(4)就乳房炎之調查發現,在有菌分離或檢測陽性結果中,細菌類之感染,具傳染性之病原僅Staph. auerus佔6.4%(9/141)最高,而其他傳染性病原僅佔少數,但環境性感染菌則佔多數,其中以E. coli最高(24.8%, 35/141),此結果顯示在台灣之細菌性乳房炎以環境性為主(3,4)。針對乳房炎分離之細菌進行藥物敏感性試驗發現,在台灣長期的藥物濫用,大多數之細菌的抗藥性皆有增強趨勢(4)。在黴漿菌引起之乳房炎方面,國外早已相當重視,且有報告指出黴漿菌會引起乳牛場隻乳房炎爆發,導致乳品質下降,生乳體細胞升高而導致生乳廢棄增多等現象,且亦造成場內乳房炎持續不段的增加現象(9,11,14,16)。因此對於培養不易之黴漿菌的檢測方法的改進不於餘力(8,10,11,12)。但在國內因檢測方式仍僅局限於培養方式,因其分離時間冗長,且不易分離形成乳房炎病原監測上的死角。筆者參照劉等(15 ) Nested PCR方法於90-91年採自中南部計18個乳牛場之乳房炎病例進行黴漿菌之監測發現,在有菌樣本中有40-50%陽性率(3,4)。在研究中亦發現黴漿菌與細菌混合感染比率相當高, 此可能為乳房炎一直無法根治原因之一(3,4,5),也造成乳房炎之治療上,日增困難。因此在目前對於乳牛乳房炎的降低,有必要針對個別發生嚴重之乳牛場進行監測並探討其原因,以提供不同的防治方法,期能減少乳牛場乳房炎發生率。
引起乳房炎之黴漿菌甚多,但其中Mycoplasma bovis 被歸類為具高傳染性之乳房炎病原。Ghadersohi等人(11,12)利用對Mcoplasma bovis 極為敏感之PCR進行針測澳洲牛乳房炎發現,在Mcoplasma bovis感染牛若與主要乳房炎之細菌病原合併感染會有有持續高之體細胞數。且在測定M. bovis之77%陽性牛中,19%為單獨感染,17%則與主要乳房炎之細菌病原合併感染,40%與非主要乳房炎之細菌病原合併感染。筆者於91年採用Baird 等人(8 )方法進行具傳染性Mycoplasma bovis 之nested PCR測定,比率並不高, 但仍需注意其根除以免造成傳染 (6)。由以上顯示目前國內黴漿菌之感染,仍以非傳染性黴漿菌為主,且會與細菌或黴菌共同感染,而具傳染性Mycoplasma bovis仍佔少數。故我國乳牛乳房炎之感染已由傳統之傳染性細菌感染為主軸,逐漸轉變為環境性細菌與黴漿菌共通感染之模式出現,而在現場常見乳房炎持續不斷發生,且有部份牛隻之乳房炎臨床發現治療好了又發生,其原因在此。進一步探究其原因,亦與目前乳房炎製劑中,多為治療細菌類或黴菌類之藥物,而無殺滅黴漿菌之乳房炎製劑,造成檢驗上僅檢測細菌和黴菌,忽略黴漿菌,形成用藥上僅將細菌或黴菌壓制或殺滅,但黴漿菌仍存在而不受影響,形成致病原,使得酪農乳房炎用藥比率逐漸攀升又不見效果,此可能是我國目前許多牧場乳房炎之問題核心之一。由於目前鮮乳政策朝向低生乳體細胞數,而黴漿菌性或混合菌性之乳房炎對此影響層面甚大,因此,如何降低其發生率為重要課題之一。在目前診斷上,細菌及黴菌已有良好之診斷方法及藥物敏感性試驗,但黴漿菌篩檢上,利用PCR方法雖能達到偵測之目地,如果在大量樣品時則無法及時獲得結果,因此除在診斷上必須再進一步發展有效、快速且能大量篩檢黴漿菌的方法,例如酵素免疫分析法(ELISA)或免疫墨點法(Immunodot)等來進行篩檢。另外,發展抗細菌與黴漿菌之併用之乳房炎治療藥劑為目前急需,才能使酪農及時投與正確藥物,對此類之乳房炎才有真正的療效。此需產、官、學界三者互相配合建立乳房炎檢測系統與治療藥劑開發,纔能真正有利於酪農對於頭痛之乳房炎問題的改善及正確的用藥。
參 考 文 獻
1. 郭志祺。1990。乳牛黴漿菌性乳房炎及子宮內膜炎和治療方法之研究。台灣大學碩士論文。
2. 徐慶霖。1988。臺灣中部地區乳牛Mycoplasma 之分離與發生牛乳房炎關係探討。中興大學碩士論文。
3. 劉世賢、 吳虹慧、呂車鳳 、劉炳燦、施閔郡、林修文。2002。牛乳房炎黴菌分離及藥物敏感性試驗 台灣省畜牧獸醫學會91年度春季學術研討會 p.79
4. 劉世賢、施閔郡、劉炳燦、黃森源、吳虹惠、余明德、廖明輝。2002。乳牛乳房炎細菌分離鑑定及藥物敏感性試驗。中華民國獸醫學會暨臺灣省畜牧學會91年度聯合學術發表會。P135。
5. 劉世賢、陳致吟、廖明輝、劉宏仁、吳虹慧、劉炳燦、馮翰鵬。 2001。應用聚合酵素連鎖反應偵測乳牛乳房炎之黴漿菌感染。台灣省畜牧獸醫學會九十年度春季研討會。p.58。
6. 劉世賢、蔡惠萍、廖明輝、陳致吟、羅振宏、劉炳燦、黃森源。2002。應用巢式PCR檢測乳房炎乳汁中之Mycoplasma bovis。中華民國獸醫學會暨臺灣省畜牧學會91年度聯合學術發表會。p133。
7. 趙瑞龍、楊忠亮、董好德、張登欽。1997。臺灣中部地區乳牛潛在性乳房炎調查。中華獸醫誌。 23:61-65。
8. Baird, S.C., J. Carman, R.P. Dinsmore, R.L. Walker and J.K.Collins. 1999. Detection and identification of Mycoplasma from bovine mastitis infections using a nested polymerase chain reaction. J. Vet. Diagon. Invest. 11:432-435.
9. .Beaudeau, F., H. Seegers, C. Fourichon and P. Hortet. 1998. Association between milk somatic cell count up to 400,000 cell/ml and clinical mastitis in French olstein cows. Vet. Rec. 143:685-687.
10. .Buttler, J. , C. Pinnow, R. Rosenbusch and Leo. Timms. 2000. Development of a method PCR for detection of Mycoplasma bovis in preserved milk samples. Pacific Ccongress on Milk Quality and Mastitis Control. P. 322.
11. Ghadersohi, A., R.G. Hirst, J. Forbes-Faulkener and R.J. Coelen. 1999. Preliminary studies on the prevalence of Mycoplasma bovis mastitis in dairy cattle in Australia. Vet. Microbiol. 65:185-94.
12. Ghadersohi, A., R.J. Coelen. and R.G. Hirst. 1997. Development of a specific DNA probe and PCR for detection of Mycoplasma bovis. 56:87-98.
13. Jasper, D.E.. 1976. Coliform mastitis in pastered herds. Theriology 6:175-178.
14. Jasper, D.E.. 1977. Mycoplasma and mycoplasma mastitis. J. Am. Vet. Assoc. 170:167-72.
15. Liu, H. J. , Y.H. Wu, M.C. Tung, C.D. Chang, M. Y. Lin and C.H. Tu. 2000. Detection of Mycoplasma using two-step polymerase chain reaction. Bulletin of National Pingtung University of Science and Technology. 9:109-112.
16. Mackie, D.P., D. Finlay, N. Brice and H.J. Ball. 2000. Mixed mycoplasma mastitis outbreak in a dairy herd. Vet. Rec. 147:335-336.
(本篇載於中國化學之中化藥訊 2004 60:22-25,內有相關圖片因無法貼上,請由中化藥訊獲得)
ps.此一結晶之產生,致吟、惠萍及大動物室同學們皆有貢獻,在此一併致謝。
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